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Elisa检测试剂盒的操作步骤有哪些关键要点
16 人阅读发布时间：2025-12-03 16:02
酶联免疫吸附测定（ELISA）是一种高灵敏度、高特异性的检测技术，广泛应用于科研与临床前研究中目标蛋白的定量分析。其结果的准确性高度依赖于实验操作的规范性。任何环节的疏忽，如加样不准、洗涤不充分或温育时间偏差，都可能导致背景过高、标准曲线异常或重复性差等问题。
操作步骤关键要点
1、样品准备：
确保样品（如血清、血浆、细胞上清液等）在采集后迅速处理，避免溶血或污染，影响结果。
样品应按要求稀释，通常需要使用样品稀释液进行适当倍数的稀释。
样品应在2-8℃保存不超过一周，长期保存需置于-20℃。
2、试剂准备：
使用前将所有试剂恢复至室温，包括浓缩洗涤液应按说明书稀释使用。
确保洗涤液无沉淀，如有沉淀需充分溶解后使用。
3、温度控制
试剂需4℃-8℃冷藏保存，避免冷冻；使用前室温回温40-60分钟。
孵育温度严格按说明书（如37℃±0.5℃），避免波动。
4、避光保存
显色剂（如TMB）需现配现用，避光操作；底物反应后及时终止。
5、加标回收率控制
加标体积≤样本10%，回收率需在80%-120%内。
低浓度样本避免前滞效应，高浓度样本防钩状效应。
6、干扰因素处理
类风湿因子（RF）可通过热灭活（56℃ 30分钟）消除。
溶血样本弃用，避免亚铁血红素干扰。
7、结果分析：
根据标准曲线计算样品中的目标物浓度。
复孔检测可以提高结果的准确性，通过计算平均值来减少误差。
注意结果的线性范围，超出线性范围可能导致结果不准确。
8、注意事项：
所有操作应在无菌条件下进行，避免污染。
移液器需定期校准，确保加样量的精确。
避免交叉污染，每次更换加样器头。
试剂盒应在有效期内使用，并按照说明书的保存条件保存。
操作步骤关键要点
1、样品准备：
确保样品（如血清、血浆、细胞上清液等）在采集后迅速处理，避免溶血或污染，影响结果。
样品应按要求稀释，通常需要使用样品稀释液进行适当倍数的稀释。
样品应在2-8℃保存不超过一周，长期保存需置于-20℃。
2、试剂准备：
使用前将所有试剂恢复至室温，包括浓缩洗涤液应按说明书稀释使用。
确保洗涤液无沉淀，如有沉淀需充分溶解后使用。
3、温度控制
试剂需4℃-8℃冷藏保存，避免冷冻；使用前室温回温40-60分钟。
孵育温度严格按说明书（如37℃±0.5℃），避免波动。
4、避光保存
显色剂（如TMB）需现配现用，避光操作；底物反应后及时终止。
5、加标回收率控制
加标体积≤样本10%，回收率需在80%-120%内。
低浓度样本避免前滞效应，高浓度样本防钩状效应。
6、干扰因素处理
类风湿因子（RF）可通过热灭活（56℃ 30分钟）消除。
溶血样本弃用，避免亚铁血红素干扰。
7、结果分析：
根据标准曲线计算样品中的目标物浓度。
复孔检测可以提高结果的准确性，通过计算平均值来减少误差。
注意结果的线性范围，超出线性范围可能导致结果不准确。
8、注意事项：
所有操作应在无菌条件下进行，避免污染。
移液器需定期校准，确保加样量的精确。
避免交叉污染，每次更换加样器头。
试剂盒应在有效期内使用，并按照说明书的保存条件保存。