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ELISA阴性对照有哪些设置要点
16 人阅读发布时间：2025-12-05 10:09
ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种高度敏感的检测技术，但也容易受到试剂污染、交叉反应或操作因素的影响而产生假阳性信号。设置阴性对照的主要目的就是识别并控制这些背景噪音，从而保证阳性结果的真实可信。它通常与阳性对照、空白对照共同构成实验有效性的评价体系。
阴性对照的具体设置方法与要点
1、选择合适的样本：阴性对照应选用已知不含待测目标物的样本，且其基质应尽可能与待测样本一致。例如：
2、检测人血清时，使用健康人的正常血清。
3、检测动物免疫后血清中的抗体时，使用该动物免疫前的血清。
4、避免非特异性结合：为减少背景值，可在封闭步骤使用5%脱脂牛奶或3%BSA进行封闭，以阻断非特异性位点。
5、正确设置孔数：建议至少设置两个复孔，取平均值可提高数据的稳定性和可靠性。
6、用途明确：阴性对照主要用于计算P/N值（阳性对照OD值/阴性对照OD值），当P/N值大于2.1时，常作为判断阳性结果的有效标准之一。
以下表格总结了ELISA实验中三种主要对照的作用与设置要求：
成功进行ELISA实验的关键在于严谨地设置三类对照。阴性对照的核心是“真实反映背景水平”，必须使用成分匹配的无目标物样本。同时，必须配合阳性对照和空白对照，才能全面评估实验的有效性。若仅有阴性对照而无空白对照，则难以完全确认试剂体系是否存在异常。
阴性对照的具体设置方法与要点
1、选择合适的样本：阴性对照应选用已知不含待测目标物的样本，且其基质应尽可能与待测样本一致。例如：
2、检测人血清时，使用健康人的正常血清。
3、检测动物免疫后血清中的抗体时，使用该动物免疫前的血清。
4、避免非特异性结合：为减少背景值，可在封闭步骤使用5%脱脂牛奶或3%BSA进行封闭，以阻断非特异性位点。
5、正确设置孔数：建议至少设置两个复孔，取平均值可提高数据的稳定性和可靠性。
6、用途明确：阴性对照主要用于计算P/N值（阳性对照OD值/阴性对照OD值），当P/N值大于2.1时，常作为判断阳性结果的有效标准之一。
以下表格总结了ELISA实验中三种主要对照的作用与设置要求：
| 对照类型 | 主要作用 | 推荐设置材料 |
| 阴性对照 | 提供背景OD值基准，用于评估非特异性结合和计算P/N值，帮助判定样品是否为阳性 | 已知不含目标物的样本（如正常人血清、动物免疫前血清） |
| 阳性对照 | 验证整个检测体系（试剂、操作）是否正常工作，确保能检测到目标物 | 已知含有目标物的样本（如病人血清、含标准品的缓冲液） |
| 空白对照 | 监控试剂本底，排除包被液、酶结合物等试剂自身产生的信号干扰 | 不加任何样本，仅加入稀释液或缓冲液 |