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为预防细胞换液过程中可能产生的污染,可以怎样做?

39 人阅读发布时间:2025-11-21 09:14

细胞换液是指在细胞培养过程中,定期或在特定情况下更换细胞培养基的过程。这一操作对于维持细胞的健康生长至关重要。预防细胞换液过程中的污染需要从规范操作环境管理耗材管理三个方面进行系统防控。以下是具体措施:
一、规范操作
1、‌无菌操作
换液前需用75%酒精消毒双手,穿戴实验服、口罩和手套。
操作时减少培养瓶敞口时间,避免剧烈晃动引起空气流动。
使用一次性无菌吸管和移液器,做到专管专用,避免交叉污染。
2、‌操作流程优化
换液动作需轻柔,沿培养瓶壁缓慢加入新鲜培养基,减少对细胞的物理冲击。
换液后立即观察细胞状态,记录操作细节以便追溯
二、环境管理
1、‌超净台与细胞房维护
超净台使用前需紫外灯消毒30分钟,并用酒精擦拭台面。
细胞房定期清洁消毒,地面、台面使用75%酒精或新洁尔灭擦拭。
培养箱每周清洁,加湿托盘添加真菌抑制剂或更换无菌去离子水。
2、‌设备消毒
显微镜、水浴锅等设备使用前后需用酒精消毒。
培养箱内溢出液需立即用酒精清除,避免微生物滋生。
三、耗材管理
1、‌耗材灭菌与使用
培养瓶、吸管等玻璃器皿需高压蒸汽灭菌(121℃、15-20分钟)。
一次性耗材(如枪头、培养板)选用无菌包装,必要时二次紫外消毒。
2、‌试剂质量控制‌
血清、培养基等试剂需从可靠渠道购买,使用前过滤除菌(0.22μm滤膜)。
培养基预热至37℃后再使用,避免温度刺激细胞。
四、收尾与监控:降低后续风险
1、台面清洁:换液后用酒精擦拭超净台,废液缸及时清空并灭菌;培养瓶表面消毒后再放回培养箱,缩短开门时间。
2、污染预警:定期用支原体检测试剂盒(如qPCR法)筛查细胞,发现培养液pH骤变或细胞形态异常时立即隔离。
3、耗材管理:使用带滤芯的无菌吸头,移液器定期高压灭菌;冻存管确保拧紧,复苏时避免水浴锅液体渗入。
通过以上措施可有效降低换液污染风险,保障实验结果的可靠性。

 

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