细胞换液是指在细胞培养过程中,定期或在特定情况下更换细胞培养基的过程。这一操作对于维持细胞的健康生长至关重要。预防细胞换液过程中的污染需要从规范操作、环境管理和耗材管理三个方面进行系统防控。以下是具体措施:
一、规范操作
1、无菌操作
换液前需用75%酒精消毒双手,穿戴实验服、口罩和手套。
操作时减少培养瓶敞口时间,避免剧烈晃动引起空气流动。
使用一次性无菌吸管和移液器,做到专管专用,避免交叉污染。
2、操作流程优化
换液动作需轻柔,沿培养瓶壁缓慢加入新鲜培养基,减少对细胞的物理冲击。
换液后立即观察细胞状态,记录操作细节以便追溯
二、环境管理
1、超净台与细胞房维护
超净台使用前需紫外灯消毒30分钟,并用酒精擦拭台面。
细胞房定期清洁消毒,地面、台面使用75%酒精或新洁尔灭擦拭。
培养箱每周清洁,加湿托盘添加真菌抑制剂或更换无菌去离子水。
2、设备消毒
显微镜、水浴锅等设备使用前后需用酒精消毒。
培养箱内溢出液需立即用酒精清除,避免微生物滋生。
三、耗材管理
1、耗材灭菌与使用
培养瓶、吸管等玻璃器皿需高压蒸汽灭菌(121℃、15-20分钟)。
一次性耗材(如枪头、培养板)选用无菌包装,必要时二次紫外消毒。
2、试剂质量控制
血清、培养基等试剂需从可靠渠道购买,使用前过滤除菌(0.22μm滤膜)。
培养基预热至37℃后再使用,避免温度刺激细胞。
四、收尾与监控:降低后续风险
1、台面清洁:换液后用酒精擦拭超净台,废液缸及时清空并灭菌;培养瓶表面消毒后再放回培养箱,缩短开门时间。
2、污染预警:定期用支原体检测试剂盒(如qPCR法)筛查细胞,发现培养液pH骤变或细胞形态异常时立即隔离。
3、耗材管理:使用带滤芯的无菌吸头,移液器定期高压灭菌;冻存管确保拧紧,复苏时避免水浴锅液体渗入。
通过以上措施可有效降低换液污染风险,保障实验结果的可靠性。