细胞污染类型及预防细胞污染措施综述

细胞污染是细胞培养过程中常见的问题，它会导致实验失败、时间延误和成本增加。常见的细胞污染类型包括细菌污染、真菌污染、支原体污染、黑胶虫污染、病毒污染以及其他细胞系的交叉污染。每种污染都有其特定的症状和处理方式：

1、细菌污染
症状：培养基变黄变浑浊，培养基中出现黑色细条沙状或球状、杆状细菌，有时伴有异味。
处理方法：在培养基中加入抗生素处理，如四环素、庆大霉素或链霉素，但效果有限，细胞状态可能受到影响。最好丢弃污染细胞，防止进一步扩散。
2、真菌污染
症状：培养液清亮透明，显微镜下可见丝状、管状或树状的菌丝，细胞生长变慢，pH值升高。
处理方法：果断丢弃污染细胞，彻底消毒培养间、CO2孵箱、器皿和培养液，使用酒精和新洁尔灭进行清洁。
3、支原体污染
症状：培养液变浑浊，细胞状态变差、生长变慢，显微镜下可见小黑点，但培养基不浑浊。
处理方法：使用抗支原体试剂处理，但效果一般，最好丢弃污染细胞，防止交叉污染。
4、黑胶虫污染
症状：低倍镜下为黑色点状，高倍镜下可见黑色小虫游动，培养液不浑浊。
处理方法：对细胞生长影响不大，但可能与血清质量有关，可以通过更换血清和加强无菌操作来处理。
5、霉菌污染
症状：培养液中出现絮状杂质，镜下可见细丝状团状漂浮物，细胞状态变差。
处理方法：丢弃污染细胞，彻底消毒培养环境，使用酒精和新洁尔灭清洁。
6、病毒污染
症状：细胞形态改变，生长变慢，可能伴有特定的病毒特征。
处理方法：丢弃污染细胞，使用抗病毒药物处理，但效果有限。
7、非细胞系交叉污染
症状：细胞形态和生长特性发生变化。
处理方法：丢弃污染细胞，进行严格的无菌操作和细胞系验证。

       一旦发现细胞污染，及时丢弃污染细胞是最佳选择，以防止污染扩散。对于细菌和支原体污染，虽然有抗污染试剂，但效果有限，且可能影响细胞状态。因此，预防重于治疗，严格遵守无菌操作规范是避免细胞污染的关键。

      预防细胞污染是细胞培养成功的关键，主要包括物理性、化学性和生物性污染的防治措施。物理性污染的防治需要合理设计实验室环境，避免温度波动、放射线、振动、紫外线或荧光等对细胞的不良影响。化学性污染则通过使用超纯水、保证血清质量和批次一致性、避免化学试剂污染等来控制。生物性污染预防则需要严格执行无菌操作，包括：
1、无菌操作技术：进入细胞培养区域时，穿戴防护服、口罩、手套，并保持实验室清洁。
2、生物安全柜的使用：确保生物安全柜内器材合理布局，避免湍流，操作时保持工作空间有序，减少污染风险。
3、定期维护设备：如水浴锅、CO₂培养箱需定期清理和消毒，避免细菌滋生。
4、环境控制：维持细胞房10000级洁净度，定期进行沉降菌检测，使用紫外照射和消毒剂进行环境消毒。
5、人员管理：实验人员需穿连体衣、戴口罩、手套，减少走动，操作时避免讲话，养成良好的无菌操作习惯。
6、实验用品管理：试剂和耗材需无菌，耗材使用前后应高压灭菌，培养基中可添加双抗。
7、监控细胞状态：定期检查细胞形态和培养基颜色，及时发现污染迹象。
8、选择优质血清：使用通过严格质量检测的血清，减少污染风险。
针对支原体污染，除了上述措施，还需使用支原体抑制剂，如Zell Shield，并确保操作环境无新的支原体污染。总之，预防细胞污染是一个系统工程，需要从环境、操作、设备和材料等多个方面综合考虑。