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生化试剂盒验证参考要素及选购注意事项
278 人阅读发布时间：2024-09-10 11:36
通常生化试剂盒可分为液体单试剂和液体双试剂，前者特别适用于半自动生化分析仪和小型自动生化分析仪，使用方便，缺点是稳定性较差。与单试剂相比，双试剂提高了抗干扰能力，具有稳定性能较好，可消除样品自身空白等特点。此外还有多项同测组合试剂、浓缩试剂等。
对新的试剂盒，我们首先要查看其资质是否齐全，是否具有国家食品药品监督管理总局的相关批号，是否为合法有效试剂，是否有相关的临床试验验证等。其次，在本实验室，可做以下工作来进行验证是否适合使用。
选购试剂盒的一般要求：
1．所采用的测定方法特异性好，灵敏度、准确度、精密度符合卫生部临床检验中心、IFCC、WHO 等推荐的方法性能。
2．试剂盒的储存期至少为1 年。
3．水溶性、低粘性、无腐蚀、无毒害、不爆炸、不易燃、不污染环境。
4．所用标准品或标准参考物符合卫生部临床检验中心、IFCC、WHO 推荐的标准和要求。
验证生化试剂盒是否适合使用参考要素：
一、试剂空白吸光度
用蒸馏水做空白，用指定的空白液加入试剂作为样品测试，在测试主波长下，记录测试启动时的吸光度(A1)和约5分钟后的吸光度(A2)，A2测试结果即为试剂空白吸光度测定值，应符合生产企业给定范围。这是判定试剂质量的一个有效指标。
二、试剂空白变化速率
对于速率法试剂盒，用指定的空白液加入试剂作为样品测试时，在测试主波长下，记录测试启动时的吸光度(A1)和约5分钟(T)后的吸光度(A2)，计算试剂空白吸光度变化率(DA/min)，应不超过生产企业给定值。测定试剂空白吸光度变化(ΔA/min)，用来检查试剂在工作状态下的稳定性。但事实上，试剂空白吸光度变化速率无法反映试剂盒的稳定性，试剂空白吸光度变化速率主要反映干扰程度和仪器的稳定性。
三、分析灵敏度
用吸光度差值(ΔA)或吸光度变化(ΔA/min)来表示单位浓度的被测物反应所引起的信号变化，其含义类似摩尔消光系数，应符合生产企业给定范围。需要注意的是，分析灵敏度不是越高越好，以适合待测物检测范围为原则。分析灵敏度一般用于批间比较，较能反映制造商的配方、原料的一致性。
四、线性范围
取高浓度样品和低浓度样品按不同比例混合成5个浓度做线性试验。线性范围内的分析性能应符合如下要求：①线性性相关系数r应≥0.990;②线性偏差应不超过生产企业给定值。试剂(盒)的线性范围越宽，临床复测几率越小，但与样品/试剂比例成反比。
五、重复性
1. 批内重复性 在重复性条件下，用高、中、低三个水平浓度(高、低浓度应超过参考区间20%～30%，中浓度水平在参考区间之内)的控制血清或新鲜人血清测试试剂，重复测试至少10次。
2. 批间重复性 用质量控制血清测试3×3(3个批号，每个批号取3瓶)批间差，较能反映制造商的配方、原料的一致性。干粉或冻干试剂还需测定批内瓶间差，测定同一批号的试剂20瓶，用变异系数(CV)来表示。变异系数(CV)不超过生产企业给定值。
六、准确度
1. 相对偏差 直接用试剂盒测定参考物质(平行3次)，评价测定均值与靶值的偏离程度。也可用由参考方法定值的高、中、低三个浓度的人混合血清，用试剂盒平行测定3次，计算均值与定值的相对偏差。
2. 比对试验 既无参考物质、参考血清，也无标准品，也可用比对试验来验证准确度。
七、校准品溯源、质控品赋值
1. 校准品溯源性 根据GB/T21415及有关规定提供校准品的来源、赋值过程及测量不确定度等内容，明确溯源途径。
2. 质控品赋值有效性 质控品的测定结果应在试剂盒规定的范围内。
八、稳定性
1. 效期稳定性 取已到效期的试剂盒按以上评价方法对试剂盒性能指标进行评价。
2. 热稳定性试验 生化试剂盒一般置2-8℃保存，为了快速有效地评价试剂盒的稳定性，可以用加速试验来估计。
3. 开瓶稳定性 干粉试剂开瓶后(复溶后)在规定的储存条件下保存至预期时间内，产品的性能至少应符合线性和准确度的要求。
选购试剂盒的注意事项：
1．要仔细阅读试剂盒的说明书，对试剂盒选用方法有所了解，科学研究工作时应选择参考方法试剂盒，医疗预防工作应选择推荐的常规方法试剂盒，或选择公认的测定方法试剂盒。此外，对试剂盒的组成、方法性能指标加以分析，是用于手工操作，还是用于自动分析仪。属于后者，其实验参数是否与本单位自动分析仪的实验参数相符。
2．有无卫生部的批准文号。凡已列入卫生部临床检验体外诊断试剂审批管理范围的试剂盒，没有生产批准文号的，不应使用。对有生产批准文号者，也需考察生产厂家的信誉。
3．对试剂盒的包装、理学性能、方法学性能指标进行考察和检测，并经实际应用。符合说明书规定及本室实验要求者方可选购。
4．根据本单位的日工作量、分析仪试剂用量、试剂复溶后4℃稳定期等因素综合分析，应选购合适包装，近期出厂的产品。
5．注意季节对试剂质量的影响。一般在气温较低的季节**试剂，防止试剂盒在运输途中变质。
6．在试剂盒质量前提下，应选购价格低的产品。
对新的试剂盒，我们首先要查看其资质是否齐全，是否具有国家食品药品监督管理总局的相关批号，是否为合法有效试剂，是否有相关的临床试验验证等。其次，在本实验室，可做以下工作来进行验证是否适合使用。
选购试剂盒的一般要求：
1．所采用的测定方法特异性好，灵敏度、准确度、精密度符合卫生部临床检验中心、IFCC、WHO 等推荐的方法性能。
2．试剂盒的储存期至少为1 年。
3．水溶性、低粘性、无腐蚀、无毒害、不爆炸、不易燃、不污染环境。
4．所用标准品或标准参考物符合卫生部临床检验中心、IFCC、WHO 推荐的标准和要求。
验证生化试剂盒是否适合使用参考要素：
一、试剂空白吸光度
用蒸馏水做空白，用指定的空白液加入试剂作为样品测试，在测试主波长下，记录测试启动时的吸光度(A1)和约5分钟后的吸光度(A2)，A2测试结果即为试剂空白吸光度测定值，应符合生产企业给定范围。这是判定试剂质量的一个有效指标。
二、试剂空白变化速率
对于速率法试剂盒，用指定的空白液加入试剂作为样品测试时，在测试主波长下，记录测试启动时的吸光度(A1)和约5分钟(T)后的吸光度(A2)，计算试剂空白吸光度变化率(DA/min)，应不超过生产企业给定值。测定试剂空白吸光度变化(ΔA/min)，用来检查试剂在工作状态下的稳定性。但事实上，试剂空白吸光度变化速率无法反映试剂盒的稳定性，试剂空白吸光度变化速率主要反映干扰程度和仪器的稳定性。
三、分析灵敏度
用吸光度差值(ΔA)或吸光度变化(ΔA/min)来表示单位浓度的被测物反应所引起的信号变化，其含义类似摩尔消光系数，应符合生产企业给定范围。需要注意的是，分析灵敏度不是越高越好，以适合待测物检测范围为原则。分析灵敏度一般用于批间比较，较能反映制造商的配方、原料的一致性。
四、线性范围
取高浓度样品和低浓度样品按不同比例混合成5个浓度做线性试验。线性范围内的分析性能应符合如下要求：①线性性相关系数r应≥0.990;②线性偏差应不超过生产企业给定值。试剂(盒)的线性范围越宽，临床复测几率越小，但与样品/试剂比例成反比。
五、重复性
1. 批内重复性 在重复性条件下，用高、中、低三个水平浓度(高、低浓度应超过参考区间20%～30%，中浓度水平在参考区间之内)的控制血清或新鲜人血清测试试剂，重复测试至少10次。
2. 批间重复性 用质量控制血清测试3×3(3个批号，每个批号取3瓶)批间差，较能反映制造商的配方、原料的一致性。干粉或冻干试剂还需测定批内瓶间差，测定同一批号的试剂20瓶，用变异系数(CV)来表示。变异系数(CV)不超过生产企业给定值。
六、准确度
1. 相对偏差 直接用试剂盒测定参考物质(平行3次)，评价测定均值与靶值的偏离程度。也可用由参考方法定值的高、中、低三个浓度的人混合血清，用试剂盒平行测定3次，计算均值与定值的相对偏差。
2. 比对试验 既无参考物质、参考血清，也无标准品，也可用比对试验来验证准确度。
七、校准品溯源、质控品赋值
1. 校准品溯源性 根据GB/T21415及有关规定提供校准品的来源、赋值过程及测量不确定度等内容，明确溯源途径。
2. 质控品赋值有效性 质控品的测定结果应在试剂盒规定的范围内。
八、稳定性
1. 效期稳定性 取已到效期的试剂盒按以上评价方法对试剂盒性能指标进行评价。
2. 热稳定性试验 生化试剂盒一般置2-8℃保存，为了快速有效地评价试剂盒的稳定性，可以用加速试验来估计。
3. 开瓶稳定性 干粉试剂开瓶后(复溶后)在规定的储存条件下保存至预期时间内，产品的性能至少应符合线性和准确度的要求。
选购试剂盒的注意事项：
1．要仔细阅读试剂盒的说明书，对试剂盒选用方法有所了解，科学研究工作时应选择参考方法试剂盒，医疗预防工作应选择推荐的常规方法试剂盒，或选择公认的测定方法试剂盒。此外，对试剂盒的组成、方法性能指标加以分析，是用于手工操作，还是用于自动分析仪。属于后者，其实验参数是否与本单位自动分析仪的实验参数相符。
2．有无卫生部的批准文号。凡已列入卫生部临床检验体外诊断试剂审批管理范围的试剂盒，没有生产批准文号的，不应使用。对有生产批准文号者，也需考察生产厂家的信誉。
3．对试剂盒的包装、理学性能、方法学性能指标进行考察和检测，并经实际应用。符合说明书规定及本室实验要求者方可选购。
4．根据本单位的日工作量、分析仪试剂用量、试剂复溶后4℃稳定期等因素综合分析，应选购合适包装，近期出厂的产品。
5．注意季节对试剂质量的影响。一般在气温较低的季节**试剂，防止试剂盒在运输途中变质。
6．在试剂盒质量前提下，应选购价格低的产品。