在生物医学研究中，酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种常用的固相酶免疫测定分析方法，由于ELISA方法灵敏，特异性强不需要特殊设备，所以被广泛应用于各种抗原和抗体测定。然而，这一试验的准确性和可靠性在很大程度上取决于所使用的标本。标本的质量、处理和保存条件都会对ELISA试验结果产生深远影响。


首先，标本的采集是影响ELISA试验结果的关键因素之一。采集过程中，如果操作不规范或技术不熟练，可能会导致标本污染、溶血或凝血等问题，从而影响试验结果的准确性。因此，采集标本时应严格遵守操作规程，确保采集到的标本具有代表性且无污染。

其次，标本的处理和保存条件对ELISA试验结果同样至关重要。处理过程中，如离心、稀释等操作若不当，可能导致标本中的目标物质损失或变性。同时，保存条件如温度、湿度和光照等也会影响标本的稳定性，进而影响试验结果的可靠性。因此，在处理和保存标本时，应采取适当的措施，确保标本的质量和稳定性。

用于ELISA实验的样本有多种类型，包括血清、血浆、细胞培养上清、尿液以及组织匀浆等。不同样本类型的预处理方法存在差异。合适的样本预处理，是确保ELISA实验准确性的第一步。这里，我们将介绍几种的常规样本处理方式方法：

1、血清
血清是ELISA实验最常用的样本，其预处理也十分简单。
①使用无热原、无内毒素的试管或离心管采集血液样本，将试管或离心管在室温下放置1小时或2-8℃过夜，分离出血清；
②2-8℃条件下，以1000×g离心20分钟，小心收集上层血清。
2、血浆
①使用含抗凝剂的采血管或离心管采集血液样本，采集后30分钟内，2-8℃条件下，以1000×g离心15分钟，小心收集上层血浆；
②常见的抗凝剂包括：EDTA钠盐，肝素钠，枸橼酸钠等。
3、细胞培养上清
将细胞培养上清液吸入离心管中，在2-8℃条件下，以1000×g离心20分钟，除去细胞碎片和杂质，收集上清液。
4、细胞裂解液
①吸出培养板中的培养基，用胰蛋白酶消化细胞，再加入适量的培养基，将培养板上的细胞冲洗干净（悬浮细胞可以省略该步骤）；
②将细胞悬浮液收集到离心管中，在2-8℃条件下，以1000×g离心5分钟，再吸去培养基，用预冷PBS洗涤细胞3次；
③加入适量的预冷PBS（建议在使用前立即加入蛋白酶抑制剂），重悬细胞。添加比例：约1×106个细胞加入150-250μL PBS重悬细胞；
④使样本在-20℃或-80℃条件和室温条件下反复冻融，重复冻融过程数次，直至细胞完全裂解。也可使用超声波细胞破碎器，超声处理悬浮液来裂解细胞；
⑤2-8℃条件下，以1500×g离心10分钟，去除细胞碎片，收集上清液。
5、组织匀浆
①用预冷的PBS（0.01M，PH7.4）冲洗组织，除去表面残留的血液或杂质；
②将组织块称重，再切成尽可能小的碎块，以便充分匀浆；
③加入适量的预冷PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g组织样品对应9mL PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂），用玻璃匀浆器在冰上或冰浴中充分匀浆。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融；
④将匀浆液吸入离心管中，2-8℃条件下，以5000×g离心5分钟，收集上清液。

此外，不同类型的标本对ELISA试验结果的影响也有所不同。例如，血清、血浆和全血等不同类型的标本在成分和结构上存在差异，因此在进行ELISA试验时应根据具体情况选择合适的标本类型。

下面来探讨标本不同情况对ELISA试验的影响：
 1.  溶血标本及混有红细胞的血清采用ELISA法检测易产生假阳性。可能是溶血血清中含有过氧化酶物质（红细胞或血红蛋白中的亚铁血红素），在洗涤过程中往往难以洗脱，它可使H2O2释放出原生态氧（O），从而催化底物四甲基C6H6胺生成可溶性的有色物质，即显蓝色，产生假阳性。所以严重溶血标本禁用。
 
 2. 标本受细菌污染。因菌体中可能含有内源性辣根过氧化物酶，因此，被细菌污染的标本同溶血标本一样，亦可产生非特异性显色而干扰测定结果。
 
 3.  标本保存不当。在冰箱中保存过久的标本，在间接法ELISA测定中会导致本底过深、造成假阳性；为克服上述干扰，ELISA试剂盒测定的血清标本宜为新鲜采集；如不能立即测定，5 d内测定的血清标本可存放于4℃，1周后测定的血清标本应低温冻存；冻存后融解的标本，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混合后再测定，但混匀时应轻柔，不可强烈振荡。
  
 4. 塑料试管能吸附抗原物质，样本久置在塑料管内会使样本内抗原含量下降造成假阴性。
好使用真空采血管；并使用非抗凝标本，肝素抗凝血浆会增加OD值，EDTA、酶抑制剂（如NaN3）可抑制ELISA系统中辣根过氧化物酶活性。
  
 5. 标本凝固不全。 在工作中，有时为了争取时间快速检测，常在血液还未开始凝固时即强行离心分离血清，使血清中仍残留部分纤维蛋白原，在ELISA测定过程中可以形成肉眼可见的纤维蛋白块，易造成假阳性结果；因此血液标本采集后必须使其充分凝固后再分离血清。

综上所述，标本对ELISA试验的影响不容忽视。为了确保试验结果的准确性和可靠性，我们应重视标本的采集、处理和保存等环节，严格遵守操作规程，并采取适当的措施优化试验条件。