一、无菌操作
细胞培养最看重的就是无菌操作，无菌操作是细胞培养是否成功的关键点。

1、使用前用75%的乙醇擦拭细胞间的桌面、超净台、孵箱和离心机等；紫外照射细胞间和超净台30分钟以上才可以进入使用。

2、进入细胞间必须穿上隔离服或者细胞间专用的白大衣，戴上手套和口罩，换上拖鞋，严格意义上来说，帽子也是要带的。除了隔离服，其他穿着物品最好一次性使用。

3、凡是放入超净台中的不是一次性使用的物品事先都需要经过高压灭菌；不能进行高压处理的物品也需要经过75%的乙醇消毒。包括酒精灯、吸管、移液器、试管架、培养皿、废液缸等。

4、操作过程中尽量接近酒精灯；用镊子拿取枪头、离心管、吸管等物品时，避免碰到使用端；不要在开口器皿的上端进行操作。

5、细胞间的设计都是一层层的隔间，每一层隔间的拉门都必须关好；当有人在超净台工作时，其他人员不允许进入操作区域。

二、培养基:
1、培养基的选择依细胞种类而定。如果是从别的实验室借来的细胞，最初阶段一定要保持细胞原有的培养条件；特殊种类的细胞，比如内皮细胞，可以借鉴网上培养成功的条件，添加一些特定成分。
2、液体培养基的保存条件应是冰箱4度冷藏。有的大实验室细胞量多，一次性购买的培养基瓶数也多，有些人可能觉得-20冰箱保存时间会更久一些。但是经过冷冻后的培养基再溶化时，你会发现培养基的颜色发生变化，颜色变深，这就是培养基的PH值升高了。
3、培养基中都含有大量的谷氨酰胺，用来合成细胞生长所需要的核酸和蛋白质。但是谷氨酰胺在溶液中不稳定，保存4周后的培养基需要重新加入谷氨酰胺，所以尽量不要一次配太多的培养基。
4、细胞适合的培养基PH值是7.2-7.4，偏高或偏低都不好，但相对于碱性条件而言，细胞更耐酸。原代细胞对PH值的变化很敏感，而永生性细胞相对来说忍受力更强一些。
5、造成皿或瓶内培养基PH值变化的原因有很多：细胞增殖速度的快慢、孵箱内二氧化碳的浓度不准确、培养瓶的盖子拧紧或者发生了污染。如果发现细胞生长过慢，刨除细胞本身状态的原因，可以在培养液中添加丙酮酸钠（丙酮酸钠是糖酵解的中间产物，为细胞生长提供ATP，提供合成大代谢所需要的碳源，使用浓度通常是0.1mM）。
6、细胞发生污染，培养基的PH值也会发生变化。如果新配置的培养基出现沉淀，很可能是广口瓶没有清洗干净，瓶中残留的磷酸盐造成培养基成分的析出。
7、孵箱内湿度对维持培养基的渗透压也有很重要的作用。大部分细胞适应的渗透压在260-320mOsm/kg。湿度不够时，培养基蒸发，液体的渗透压就会升高。
8、培养基在使用前需提前从冰箱拿出，使其恢复至室温或者37℃水浴。
9、操作过程中，如果枪头中已经有培养基或其他液体成分，不要再经过酒精灯被高温加热。高温不仅会使有效成分失效，更有可能产生有毒物质。
10、我们购买的培养基瓶上都会标注避光保存，这是因为培养基中的某些成分遇光会产生过氧化氢，具有细胞毒性。我们在超净台中处理细胞时，因为时间较短，不会产生太大问题。但是如果长时间放置在室外或灯光下照射，或者有的冷藏冰柜的门是玻璃的，就会造成培养基质量的下降。