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酶联免疫试剂盒(ELISA)试验结果分析方法

人阅读 发布时间:2021-10-26 11:10

酶联免疫试剂盒(ELISA)试验分析方法:
1、 标准曲线的测定,标准曲线至少由5个浓度组成,测定次数不少于5次,以确定工作浓度范围和IC50范围。一般临界值为IC50附近,检测灵敏度高。
2、 样品检测限的测定。
3、 样品添加回收实验。对禁用药物可添加定量限和2倍定量限,对于有zui高残留限量(MRL)的药物,可添加MRL和MRL上下各一个浓度。
准确度:若回收率大于40%符合相应检测标准的要求。精密度:批内变异系数每批平行样之间的变异系数小于或等于25%,对于禁用药物小于或等于30%。批间变异系数所有样品间变异系数小于或等于30%,对于禁用药物小于或等于40%。
满足以上准确度和精密度要求,说明ELISA方法可行,可用来检测药物残留。
4、 对于可用于多残留检测的试剂盒,以交叉反应率低的药物做阳性添加测定临界值(cut-off)。
5、 实际检测样品时要包括以下实验:至少做两条标准曲线,两个阴性对照品,两个添加临界值(cut-off)的阳性对照品,两个平行的待检样品。检测结果出来后通过标准曲线形状(符合检测要求为S形),IC50与临界值是否相近及阳性样品回收率,样品平行情况可确定检测是否可信。
                     


酶联免疫试剂盒(ELISA)试验结果的建议:

1. ELISA实验中样品都要做复孔或三孔,然后计算每个浓度标准品的平均OD值,复孔的变异系数应该小于20%。

2. 平均OD值减去空白孔的OD值。

3. 制作标准曲线。 以减去本底后的OD值为X轴,标准品的浓度为Y轴,利用作图软件得出一个合适的计算方法。建议使用合适的软件来作图,比如CurveExpert 1.4。这款软件能够给出很多种方法(比如直线、半对数、对数、四参数方程等)并从中选择一条最合适的方程。要想检验某条曲线是否与表中数据吻合,可以将标准品的浓度作为未知数,将对应的OD值带入该方程,计算出标准品的浓度,得到的结果应该与实际浓度很接近(+/-10%)。选择拟合度最高的那条曲线。
 

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