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ELISA实验原理与操作步骤

发布时间:2021-08-11 11:12 |  点击次数:

实验原理:
ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,间接地放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度。
                                                             

操作步骤:
1.从已平衡至室温的密封袋中取出试验所需板条,未用的板条和干燥剂请放回铝箔袋内压 实自封条,密封口袋,放回4℃。
2.空白孔加标准品和标本稀释液,其余相应孔中加标本或不同浓度标准品(100ul/孔),用封板胶纸封住反应孔,36℃孵箱孵育90分钟。
3.提前20分钟准备生物素化抗体工作液。
4.洗板5次。
5.空白孔加生物素化抗体稀释液,其余孔加入生物素化抗体工作液(100ul/孔)。用新封板胶纸封住反应孔,36℃孵箱孵育60分钟。
6.提前20分钟准备酶结合物工作液。避光室温(22-25 ) ℃ 放置。
7.洗板5次。
8.空白孔加酶结合物稀释液,其余孔加入酶结合物工作液(100ul/孔)。用新封板胶纸封住反应孔,36℃孵箱,避光孵育30分钟。
9.打开酶标仪电源,预热仪器,设置好检测程序。
10.洗板5次。
11.加入显色底物(TMB)100ul/孔,避光36℃孵箱,避光孵育15分钟。
12.加入终止液100ul/孔, 混匀后即刻测量OD450值(3分钟内)。在仪器保存读数结果并打印一份纸质结果。
13.实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回电冰箱保存至有效期结束。建议保存酶标板框,以备下次或者今后试验使用。