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细胞培养中冷冻细胞活化常识分享

发布时间:2021-05-31 16:44 |  点击次数:

一. 冷冻细胞之活化原则为快速解冻,以避免冰晶重新结晶而对细胞造成伤害,导致细胞之死亡。

二. 细胞活化后,约需数日,或继代一至二代,其细胞生长或特性表现才会恢复正常 ( 例如产生单株抗体或是其它蛋白质 ) 。

三. 材料

1 . 37 oC 恒温水槽

2 .新鲜培养基
3 .无菌吸管 / 离心管 / 培养瓶

4 .液氮或干冰容器

四. 步骤:

1 .操作人员应戴防护面罩及手套,防止冷冻管可能爆裂之伤害。

2 .自液氮或干冰容器中取出冷冻管,检查盖子是否旋紧,由于热胀冷缩过程,此时盖子易松掉。

3 .将新鲜培养基置于 37 °C 水槽中回温,回温后喷以 70 % 酒精并擦拭之,移入无菌操作台内。

4 .取出冷冻管,立即放入 37 °C 水槽中快速解冻,轻摇冷冻管使其在 1 分钟内全部融化,以 70 % ethanol 擦拭保存管外部,移入无菌操作台内。

5 .取出 0.9 ml 解冻之细胞悬浮液,缓缓加入有培养基之培养容器内 ( 稀释比例为 1:10 ~ 1:15) ,混合均匀,放入 CO2 培养箱培养。另取 0.1 ml 解冻细胞悬浮液作存活测试。

6 .解冻后是否立即去除冷冻保护剂 ( 例如 DMSO 或 glycerol) ,依细胞种类而异,一般而言,大都不需要立即去除冷冻保护剂。惟若要立即去除,则将解冻之细胞悬浮液加入含有 5-10 ml 培养基之离心管内,离心 1,000 rpm, 5 分钟,移去上清液,加入新鲜培养基,混合均匀,放入 CO2 培养箱培养。

7 .若不需立即去除冷冻保存剂,则在解冻培养后隔日更换培养基。