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进口Elisa试剂盒原理与注意事项

发布时间:2020-12-23 15:02 |  点击次数:

进口Elisa试剂盒实验原理:

用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗C3抗体的微孔中依次加入标本或标准、生物素化的抗C3抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样中的C3呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样浓度。

进口Elisa试剂盒注意事项:

1、试剂应按标签说明书储存,使用恢复到室温。稀稀过后的标准应丢弃,不可保存。

2、实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。

3、不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质使用。

4、使用次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。

5、使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用充分混匀试剂盒里的各种成份及样。

6、洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

7、底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。

8、加入试剂的顺序应致,以保证所有反应板孔温育的时间样。

9、按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
 

进口Elisa试剂盒操作步骤:

1.  标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。

2.  加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl,待测样品孔中先加样品稀释液 40µl,
然后再加待测样品 10µl(样品*终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽
量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3.  温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

4.  配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

5.  洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此
重复 5 次,拍干。

6.  加酶:每孔加入酶标试剂 50µl,空白孔除外。

7.  温育:操作同 3。

8.  洗涤:操作同 5。

9.  显色:每孔先加入显色剂 A50µl,再加入显色剂 B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
10 分钟.

10. 终止:每孔加终止液 50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止
液后 15 分钟以内进行。