大鼠Elisa试剂盒试验原理：

大鼠Elisa试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中的浓度呈比例关系。

大鼠Elisa试剂盒注意事项:

(1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体，如聚氯、聚苯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。常用的是40孔聚苯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。

(2) 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18~24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。

(3) 酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取"方阵法"(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。

(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应，而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用，应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入。

大鼠Elisa试剂盒安全性:

1. 避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。

2. 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。

3. 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

4. 大鼠Elisa试剂盒应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

5. 实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

6. 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

7. 使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。

8. 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

9. 洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

10. 底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

11. 加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

12. 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。