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小鼠弓形虫(Tox)ELISA试剂盒原理与要求。

发布时间:2020-08-13 16:45 |  点击次数:

本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定小鼠血清,血浆,细胞上清及相关液体样本中小鼠弓形虫(Tox)的含量。

小鼠弓形虫(Tox)ELISA试剂盒实验原理:

  本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠弓形虫(Tox)水平。用纯化的小鼠弓形虫(Tox)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入弓形虫(Tox),再与HRP标记的弓形虫(Tox)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的弓形虫(Tox)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠弓形虫(Tox)浓度。
 

小鼠弓形虫(Tox)ELISA试剂盒要求:

  • 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
  • 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
  • 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
  • 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
  • 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
  • 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.
  • 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。