人粒细胞集落刺激因子(CSF3)抗体ELISA试剂盒实验原理以及操作步骤

人粒细胞集落刺激因子(CSF3)抗体ELISA试剂盒实验原理： 
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠肠脂肪酸结合蛋白（I-FABP)水平。用纯化的大鼠肠脂肪酸结合蛋白（I-FABP)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入肠脂肪酸结合蛋白（I-FABP)，再与HRP标记的肠脂肪酸结合蛋白（I-FABP)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的肠脂肪酸结合蛋白（I-FABP)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠肠脂肪酸结合蛋白（I-FABP)浓度。
人粒细胞集落刺激因子(CSF3)抗体ELISA试剂盒实验操作步骤：
第一步：准备试剂，样品和标准品；
试验所需器材：
1、标准规格酶标仪
2、高速离心机
3、电热恒温培养箱
4、干净的试管和Eppendof管
5、系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器
6、蒸馏水，容量瓶等、。
按人粒细胞集落刺激因子（CSF3）抗体elisa试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。ELISA中用的蒸馏水或去离子水，包括用于洗涤的，应为新鲜的和高质量的。自配的缓冲液应用pH计测量较正。从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后使用。试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。
第二步：加入准备好的样品和标准品，37℃反应90分钟；
第三步：洗板2次，加入生物素化人ANG抗体工作液，37℃反应60分钟；
第四步：洗板3次，加入ABC工作液，37℃反应30分钟；
第五步：洗板5次，加入TMB显色液，37℃反应；
第六步：加入TMB终止液；
第七步：30分钟之内读OD值；
第八步：计算标本待测因子含量。

ELISA试剂盒实验产生测定错误结果（成功与否）的因素有很多，其主要有标本因素、试剂因素和操作因素，稍有不慎都有可能会造成假阳性或假阴性的结果。所以专业的人员加标本一般都用微量加样器，按规定的量加入板孔中。每次加标本应更换吸嘴，以免发生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加样。