ELISA的应用及使用目的


ELISA应用
ELISA检测技术早在19世纪70，80年代就开发出来用于替代放射性同位素标记技术用于研究蛋白质间的相互作用（配体-受体，抗原-抗体），到如今已经接近50年的历史了。这个技术从科研的角度来说已经不具备第一性，没有太多的价值，不值得专门进行研究，更多的是一个使用的工具。工业应用落后于基础研究，ELISA技术在制药领域的应用随着近20年生物制药领域的迅猛发展展现着越来越多的使用价值，当然ELISA的应用情况也越来越复杂，这样的复杂性也使得早期的基础研究并不再具有很好的指导意义，ELISA方法滥用错用往往导致实验结果出现系统性偏差，影响实验结果的真实性，做出错误的选择。本文的写作目的旨在作为文献之外关于ELISA实际应用的一个总结，反补基础研究的不足，使得该技术更具使用价值。

从早期抗体发现阶段，杂交瘤的滴度测定，噬菌体展示的淘选筛选；抗体的稳转，瞬转和发酵过程的表达量监控，体外抗体和对应靶点蛋白或细胞表面受体的亲和力评价，细胞因子的监控，体内抗体药物的药代动力学，药效生物标志物的含量检测和免疫原性测定等均会使用ELISA技术。ELISA技术可以说是一个通用的，入门十分简单，应用面十分广泛，高通量的技术。小木虫，丁香园等关于ELISA的问题经久不衰，ELISA技术由于其检测的间接性（信号进行了多重传递），使用目的的差异性和样品来源的复杂性导致ELISA方法一旦出现异常实验地操作者很多时候很难进行问题排除。小编有过多年的ELISA相关应用方法学的开发经验，进行了多个ELISA应用的开发和方法学验证，从一个ELISA方法开发和ELISA平台技术搭建者的角度，对ELISA方法应用进行梳理和系统分析。

使用目的
从使用目的来说，ELISA方法可以分为两类。第一类：生物大分子的定量，第二类：亲和力测定评价或者筛选。抗体的稳转、瞬和发酵过程的表达量监控，细胞因子的监控，体内抗体药物的药代动力学，药效生物标志物的含量检测和免疫原性测定等可划分为第一类使用目的，杂交瘤的滴度测定，噬菌体展示的淘选筛选，体外抗体和对应靶点蛋白或细胞表面受体的亲和力评价可划分为第二类使用目的。使用目的不一样，即使使用同样的试剂材料，也会有不同实验模式和拟合曲线。下面小编将以某抗体的定量的方法开发（第一类目的）和亲和力检测方法开发（第二类目的）为例，对不同使用目的开发策略进行介绍。

该方法的检测体系如下，靶点蛋白（抗原）包被，样品（人抗体）进行反应，酶联二抗为羊抗人HRP偶联多抗，显色液为TMB显色液。使用目的是对样品进行定量和亲和力分析。

ELISA方法的检验标准
当然，从一个药物研发从业者的角度来看，开发出来的方法需要进行方法学验证，符合相关法律法规后才能够确认成功，这是从质量分析控制的尺度去对一个ELISA方法进行评估，可以说是最为严格的评估方式。这个工作可能主要集中在质量控制相关的部门，涉及到一个检验方法好坏的评价标准，小编正好也负责过几个ELISA方法的验证工作，简单介绍下，涉及到相关的法律法规，具体实验细节和程序以法规为准。