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上海博湖生物科技有限公司
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技术资料/正文
病毒滴度测定方法
110 人阅读发布时间:2019-12-30 10:30
病毒滴度测定方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)取病毒原液以及若干个不同稀释度的病毒溶液,分别接种于待接病毒的细胞中,培养36-60h,得到不同浓度病毒感染的细胞悬液;所述感染病毒的细胞悬液包括加入病毒原液的无稀释感染细胞悬液、加入各稀释度的病毒溶液的稀释感染细胞悬液;另取所述待接病毒的细胞悬液作为阴性对照液;
(2)分别测量步骤1)中所述感染病毒的细胞悬液、以及阴性对照液中细胞的侧向角散射(S)和保持完整细胞形态的细胞密度(C);
(3)按照下述步骤计算病毒滴度:a)按公式:计算细胞感染率Pm,n,m为病毒稀释度编号,n为同一病毒稀释度感染细胞的重复组数编号;其中,所述Sm,n为m号稀释度的病毒第n组感染细胞悬液的细胞侧向角散射的平均值;所述为阴性对照液中细胞的侧向角散射的平均值;所述为无稀释感染细胞悬液中细胞的侧向角散射的平均值;b)按公式:Nm,n=Cm,n×Pm,n,计算步骤a)中细胞感染率满足20%<Pm,n<80%的所述稀释感染细胞悬液的感染细胞密度Nm,n;c)按公式:Tm,n=Nm,n/Dm,n,计算步骤b)中各所述稀释感染细胞悬液的病毒滴度Tm,n,取中位值即为病毒原液的病毒滴度;其中,所述Dm,n为所述稀释感染细胞悬液的稀释度;所述病毒为杆状病毒、腺病毒、逆转录病毒、慢病毒中的一种;所述待接病毒细胞为昆虫细胞或哺乳动物细胞。